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RNEEC/HL-036 大鼠正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞：特性、培養(yǎng)與科研應(yīng)用

一、細(xì)胞基本特性與來源

二、細(xì)胞培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)

1. 培養(yǎng)基優(yōu)化
   • 基礎(chǔ)配方：推薦使用子宮內(nèi)膜細(xì)胞專用培養(yǎng)基（如 EMEM 或 DMEM/F12），添加 10% 胎牛血清（FBS）、10 ng/mL 表皮生長因子（EGF）、1 μg/mL 胰島素、100 nM 孕酮及雙抗（青霉素 100 U/mL + 鏈霉素 100 μg/mL）。
   • 激素調(diào)控：因子宮內(nèi)膜細(xì)胞對性激素敏感，研究激素相關(guān)機(jī)制時需使用無血清培養(yǎng)基（如 SFM），并額外添加 10 nM 雌二醇（E?）和 1 μM 孕酮（P?）模擬體內(nèi)周期環(huán)境。
2. 培養(yǎng)環(huán)境與傳代
   • 條件控制：37℃、5% CO?恒溫培養(yǎng)箱，濕度≥90%；培養(yǎng)基 pH 值需維持在 7.2~7.4，避免過酸或過堿影響細(xì)胞增殖。
   • 傳代策略：當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 80%~90% 時，用 0.25% 胰酶 - EDTA 消化 1~2 分鐘，以 1:2~1:3 比例傳代；消化時需密切觀察，避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)或損傷細(xì)胞膜表面激素受體。
3. 凍存與復(fù)蘇
   • 凍存液配方：90% FBS + 10% DMSO，按 5×10?~1×10? cells/mL 密度分裝，經(jīng)程序降溫盒（-80℃過夜）后轉(zhuǎn)入液氮保存，復(fù)蘇存活率可達(dá) 85% 以上。
   • 質(zhì)量控制：每批次細(xì)胞需通過支原體檢測（如 PCR 法）、活細(xì)胞計數(shù)（臺盼藍(lán)染色）及標(biāo)志物表達(dá)驗證，確保無交叉污染且表型穩(wěn)定。

三、科研應(yīng)用場景與案例

1. 生殖生理與胚胎著床研究
   RNEEC/HL-036 可模擬子宮內(nèi)膜 “容受性” 窗口期，用于研究胚胎著床的分子機(jī)制。例如：
   • 通過共培養(yǎng)模型探究滋養(yǎng)層細(xì)胞（如 JEG-3）與子宮內(nèi)膜細(xì)胞的黏附分子（如 L-selectin、整合素 αvβ3）相互作用；
   • 利用轉(zhuǎn)錄組測序分析雌激素誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞分泌因子（如白血病抑制因子 LIF）變化，揭示著床失敗的潛在靶點。
     案例：某團(tuán)隊通過該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)，孕激素預(yù)處理可上調(diào)子宮內(nèi)膜細(xì)胞 HOXA10 基因表達(dá)，增強(qiáng)其對胚胎的黏附能力，為臨床輔助生殖技術(shù)中激素用藥提供了理論依據(jù)。
2. 子宮內(nèi)膜疾病機(jī)制研究
   • 子宮內(nèi)膜異位癥：與異位內(nèi)膜細(xì)胞系（如 12Z）對比，分析正常與異位細(xì)胞的差異表達(dá)基因（如 MMPs、VEGF），探討異位病灶形成的關(guān)鍵信號通路（如 Wnt/β-catenin）；
   • 子宮內(nèi)膜增生 / 癌變：通過致癌物（如雌二醇衍生物）處理，誘導(dǎo)細(xì)胞異常增殖，結(jié)合免疫印跡檢測 p53、PI3K/AKT 等通路變化，構(gòu)建癌前病變體外模型。
     案例：在子宮內(nèi)膜炎研究中，利用脂多糖（LPS）刺激 RNEEC/HL-036，發(fā)現(xiàn) TLR4/MyD88 通路激活可誘導(dǎo) IL-6、TNF-α 等促炎因子分泌，為抗生素聯(lián)合**治療提供了靶點。
3. 藥物篩選與毒性評估
   • 激素類藥物：測試新型孕激素受體調(diào)節(jié)劑（如 Ulipristal）對子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖的抑制作用，通過 EdU 染色或 CCK-8 法評估藥物效力；
   • 生殖毒性化合物：檢測環(huán)境雌激素（如雙酚 A）對子宮內(nèi)膜細(xì)胞激素受體表達(dá)的干擾，利用 ELISA 法分析雌激素應(yīng)答基因（如 PS2、CYP19A1）的異常激活。

四、局限性與實驗注意事項

1. 種屬與個體差異：大鼠子宮內(nèi)膜的激素響應(yīng)模式與人存在差異（如大鼠動情周期為 4~5 天，人類為 28 天），涉及臨床轉(zhuǎn)化時需結(jié)合原代人子宮內(nèi)膜細(xì)胞（hEMs）或動物模型（如大鼠異位移植模型）驗證。
2. 激素微環(huán)境模擬：體外培養(yǎng)難以完全重現(xiàn)體內(nèi)復(fù)雜的激素網(wǎng)絡(luò)（如黃體生成素、前列腺素），建議采用三維培養(yǎng)（如 Matrigel 基質(zhì)膠）或與成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)，提升模型生理相關(guān)性。
3. 實驗設(shè)計要點：研究周期依賴性基因時，需同步化細(xì)胞周期（如血清饑餓法）；檢測分泌蛋白時，需使用無血清培養(yǎng)基孵育以排除血清干擾。

五、總結(jié)