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RSC-96 大鼠雪旺細(xì)胞簡(jiǎn)介

起源與背景

細(xì)胞特性

1. 形態(tài)與生長(zhǎng)特性
   • 形態(tài)：貼壁生長(zhǎng)，正常培養(yǎng)時(shí)呈梭形或多邊形，胞體較小，有 2~3 個(gè)細(xì)長(zhǎng)突起；誘導(dǎo)分化后可形成類似髓鞘的膜性結(jié)構(gòu)或細(xì)胞間連接。
   • 增殖能力：永生性細(xì)胞系，可無(wú)限傳代（建議使用 20 代以內(nèi)以保持表型穩(wěn)定），增殖速度較快，傳代周期約 2~3 天（密度達(dá) 70%~80% 時(shí)傳代）。
2. 表型與功能特性
   • 特異性標(biāo)記：
     • 高表達(dá)雪旺細(xì)胞標(biāo)志物：S100β（胞質(zhì)和核內(nèi)均有表達(dá)）、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）、髓鞘蛋白零（P0）、神經(jīng)細(xì)胞黏附分子（NCAM）等。
     • 低表達(dá)或不表達(dá)成纖維細(xì)胞標(biāo)記（如波形蛋白 Vimentin），可通過(guò)免疫熒光或流式細(xì)胞術(shù)鑒定純度。
   • 功能模擬：
     • 髓鞘形成相關(guān)：在軸突（如共培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元）或誘導(dǎo)劑（如維甲酸、cAMP 類似物）存在下，可表達(dá)髓鞘相關(guān)基因（如 MBP、PLP），模擬體內(nèi)髓鞘形成過(guò)程。
     • 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子分泌：分泌神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）等，支持神經(jīng)元存活與再生。
     • 損傷修復(fù)響應(yīng)：對(duì)促炎因子（如 TNF-α）、氧化應(yīng)激（H?O?）或神經(jīng)毒性物質(zhì)（如化療藥物紫杉醇）敏感，可用于研究雪旺細(xì)胞在神經(jīng)病變中的損傷機(jī)制。

培養(yǎng)與保存

1. 培養(yǎng)條件
   • 培養(yǎng)基：常用含 10% 胎牛血清（FBS）的 DMEM/F12（1:1）混合培養(yǎng)基，或?qū)Ｓ醚┩?xì)胞培養(yǎng)基（如添加 EGF、FGF-2 等生長(zhǎng)因子以促進(jìn)增殖），部分實(shí)驗(yàn)室添加 1% 青霉素 - 鏈霉素雙抗。
   • 環(huán)境：37℃、5% CO?恒溫培養(yǎng)箱，濕度 95% 以上，pH 維持 7.2~7.4。
   • 傳代方法：0.25% 胰酶 - EDTA 短暫消化（約 1~2 分鐘，避免過(guò)度消化損傷細(xì)胞），輕柔吹打?yàn)閱渭?xì)胞懸液，傳代比例通常為 1:2~1:3。
2. 凍存與復(fù)蘇
   • 凍存液：含 10% DMSO、20% FBS 的 DMEM/F12 培養(yǎng)基，細(xì)胞密度調(diào)整為 1×10?~5×10? cells/mL，程序降溫（-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)液氮）。
   • 復(fù)蘇要點(diǎn)：37℃水浴快速解凍，離心去除凍存液后接種于含 15% FBS 的培養(yǎng)基中，24 小時(shí)后更換新鮮培養(yǎng)基以清除死細(xì)胞。

應(yīng)用領(lǐng)域

1. 周圍神經(jīng)損傷與再生研究
   • 模擬神經(jīng)擠壓傷、切割傷后雪旺細(xì)胞的活化與增殖，探究 Wnt/β-catenin、Notch 等通路在神經(jīng)修復(fù)中的作用。
   • 評(píng)估干細(xì)胞（如間充質(zhì)干細(xì)胞）或生物材料（如殼聚糖支架）與 RSC-96 共移植對(duì)神經(jīng)再生的促進(jìn)效果。
2. 脫髓鞘疾病模型
   • 研究自身免疫性脫髓鞘（如格林 - 巴利綜合征）中雪旺細(xì)胞與免疫細(xì)胞（T 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）的相互作用，分析補(bǔ)體介導(dǎo)的髓鞘損傷機(jī)制。
   • 篩選免疫調(diào)節(jié)藥物（如干擾素 β）或神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)雪旺細(xì)胞功能的保護(hù)作用。
3. 髓鞘形成機(jī)制研究
   • 利用 RSC-96 與神經(jīng)元共培養(yǎng)體系，探討軸突信號(hào)（如 Neuregulin-1）調(diào)控雪旺細(xì)胞分化和髓鞘包裹的分子機(jī)制。
   • 研究表觀遺傳調(diào)控（如組蛋白修飾、非編碼 RNA）對(duì)髓鞘相關(guān)基因表達(dá)的影響。
4. 藥物神經(jīng)毒性評(píng)估
   • 檢測(cè)化療藥物（如順鉑、長(zhǎng)春新堿）或重金屬（如鉛）對(duì)雪旺細(xì)胞的毒性作用，通過(guò) MTT、流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡或壞死。
   • 開(kāi)發(fā)神經(jīng)保護(hù)劑（如 α- 硫辛酸、維生素 B12）的體外篩選模型。

局限性與注意事項(xiàng)

• 永生化的影響：逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染可能導(dǎo)致原癌基因激活（如 v-abl），與原代雪旺細(xì)胞相比，RSC-96 的增殖能力更強(qiáng)，但分化潛能可能受限（如髓鞘形成能力較弱），需結(jié)合原代細(xì)胞或動(dòng)物模型驗(yàn)證。
• 培養(yǎng)純度控制：部分批次細(xì)胞可能混雜成纖維細(xì)胞（尤其傳代次數(shù)較高時(shí)），建議通過(guò)差速貼壁法（成纖維細(xì)胞貼壁更快）或添加抗成纖維細(xì)胞試劑（如阿糖胞苷）純化。
• 誘導(dǎo)分化條件優(yōu)化：若需研究髓鞘形成，需優(yōu)化共培養(yǎng)體系（如神經(jīng)元與雪旺細(xì)胞比例、細(xì)胞外基質(zhì)成分）或使用特定誘導(dǎo)劑（如 forskolin 提高 cAMP 水平）。