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一、細(xì)胞來源與基本特性

生物學(xué)特性：

1. 細(xì)胞形態(tài)：懸浮生長，呈圓形或橢圓形，直徑約 10–15 μm，折光性強，細(xì)胞核大而圓，細(xì)胞質(zhì)可見豐富的核糖體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（與抗體合成相關(guān)）。
2. 表面標(biāo)志物：表達(dá) B 細(xì)胞特異性抗原（如 CD19、CD79a），不表達(dá) T 細(xì)胞或髓系細(xì)胞標(biāo)志物，確認(rèn)其 B 細(xì)胞起源。
3. 抗體分泌特性：穩(wěn)定分泌針對特定抗原的單克隆抗體，抗體亞型通常為 IgG 或 IgM（需通過實驗鑒定），具有高度特異性和均一性。
4. 遺傳穩(wěn)定性：染色體數(shù)目接近雜交瘤細(xì)胞特征性范圍（約 100–120 條），傳代 30 代以上仍保持抗體分泌能力。

二、培養(yǎng)條件與操作要點

培養(yǎng)基與環(huán)境：

• 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：常用 RPMI 1640 或 DMEM 培養(yǎng)基，添加 10%–15% 胎牛血清（FBS）、1% 雙抗（青霉素 + 鏈霉素），部分細(xì)胞需額外添加 ** 次黃嘌呤 - 氨基蝶呤 - 胸腺嘧啶（HAT）** 維持篩選壓力（早期傳代階段）。
• 培養(yǎng)環(huán)境：37℃、5% CO?恒溫培養(yǎng)箱，濕度≥90%，避免 pH 波動（維持 7.2–7.4）。

傳代與凍存：

• 傳代時機：細(xì)胞密度達(dá)  時，按 1:3–1:5 比例傳代，采用離心法（1000 rpm，5 分鐘）棄上清后重懸于新鮮培養(yǎng)基。
• 凍存方法：凍存液為 90% FBS+10% DMSO，按  密度分裝，程序降溫（-80℃過夜后轉(zhuǎn)液氮）。

質(zhì)量控制：

• 無菌檢測：定期進行細(xì)菌、真菌及支原體檢測（如 PCR 法）。
• 抗體活性驗證：通過 ELISA、Western blot 或免疫熒光檢測抗體效價及特異性，確保細(xì)胞未發(fā)生表型漂移。

三、應(yīng)用領(lǐng)域與研究價值

1. 單克隆抗體制備與生物醫(yī)藥研究

• 疾病診斷：開發(fā) ELISA 試劑盒、免疫組化（IHC）試劑或流式細(xì)胞術(shù)（FCM）抗體，用于腫瘤標(biāo)志物（如 CEA、HER2）或病原體（如病毒蛋白）檢測。
• 基礎(chǔ)研究：作為工具抗體解析抗原結(jié)構(gòu)與功能，例如在信號通路研究中阻斷或標(biāo)記特定蛋白（如細(xì)胞因子、受體）。
• 抗體工程：作為人源化或雙特異性抗體的改造模板，降低免疫原性并提升治療效果。

2. 腫瘤免疫與免疫治療

• 免疫檢查點研究：探究抗體對 T 細(xì)胞活性的調(diào)控機制，為 PD-1/PD-L1 抑制劑等免疫療法提供實驗依據(jù)。
• 抗體 - 藥物偶聯(lián)物（ADC）：通過化學(xué)偶聯(lián)將細(xì)胞毒素與抗體結(jié)合，實現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞的精準(zhǔn)殺傷。

3. 其他領(lǐng)域

• 神經(jīng)生物學(xué)：若抗體靶向神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)退行性病變相關(guān)蛋白（如 Aβ、Tau），可用于阿爾茨海默病等疾病的機制研究。
• 細(xì)胞治療質(zhì)量控制：作為流式抗體用于 CAR-T 細(xì)胞表型鑒定或純度檢測。

四、優(yōu)勢與局限性

優(yōu)勢：

1. 無限增殖與穩(wěn)定分泌：可大規(guī)模生產(chǎn)高純度抗體，避免多克隆抗體的批次差異。
2. 特異性強：單克隆抗體僅識別單一抗原表位，適用于高精度實驗（如抗原表位 Mapping）。
3. 實驗重復(fù)性高：細(xì)胞系遺傳背景明確，結(jié)果可追溯性強。

局限性：

1. 制備周期長：從細(xì)胞融合到篩選克隆需 2–3 個月，流程繁瑣。
2. 潛在免疫原性：小鼠源抗體用于人體可能引發(fā) HAMA（人抗鼠抗體）反應(yīng)，需通過基因工程改造（如嵌合抗體、人源化抗體）解決。
3. 傳代風(fēng)險：長期培養(yǎng)可能導(dǎo)致抗體分泌能力下降或基因突變，需定期克隆化篩選。

五、使用注意事項

1. 細(xì)胞復(fù)蘇與活化：凍存細(xì)胞復(fù)蘇后需盡快離心換液，避免 DMSO 對細(xì)胞的毒性影響。
2. 避免過度培養(yǎng)：高密度培養(yǎng)（$>2\times 10^6\text{cells/mL}$）可能導(dǎo)致代謝廢物積累（如乳酸、氨），影響細(xì)胞活性。
3. 倫理與生物**：涉及人類樣本或基因編輯的研究需遵循相關(guān)法規(guī)，細(xì)胞操作需在生物**柜中進行。

總結(jié)